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抗体-药物偶联物即ADC是一类生物制药药物,是通过化学链将具有生物活性的小分子药物连接到抗体上,抗体作为载体将小分子药物靶向运输到目标细胞中被设计用于治疗癌症的靶向疗法。与化学疗法不同,ADC 旨在靶向并杀死肿瘤细胞,同时保留健康细胞。类似的还有新兴的AOC(抗体-寡核苷酸偶联物)基因治疗技术。
NanoPhotometer®超微量分光光度计作为标准的紫外-可见法分析设备,已广泛的应用于包括ADC在内的单抗、双抗的定量。同时,设备的多波长/全波长测量功能,能够同时测量抗体及偶联物的吸光值和浓度。这使测量药物抗体比(DAR)变得十分方便。DAR能明显影响ADC药物的毒性。如DAR过低,则抗体携带的效率较低;反之,如DAR 过高,机体易将其识别为异物从而快速清除。DAR的异质性也可能导致毒性的不确定,造成毒性脱靶。
应用程序1 UV法蛋白定量
标准的UV法蛋白定量模块,提供基于消光系数法的蛋白浓度测量,测量主波长默认为280nm,同时也可根据抗体样品实际的最大吸收波长进行设置。对于空载抗体的定量,通常使用默认的UV280法,并使用默认的320nm背景校正。当测量ADC样品时,由于偶联药物的吸收峰通常出现在300-400nm之间,并于抗体之间有连续的紫外吸收,因此建议关闭背景校正功能(对于澄清样品),以获得准确的吸光值/浓度。在此模式下,如想在获得抗体浓度的同时,也测量偶联物的吸光值,可点击光谱曲线,可选择查看任意波长下的吸光值,找到对应的偶联物的最大吸收波长和吸光值即可。
应用程序2 多波长测量
在分析化学应用界面中,选择单/多波长测量模块,根据抗体和偶联物的最大吸收波长,进行测量波长设置,并进行背景校正波长设置(可根据需要设置在可见光/近红外波长区域)。测量结果可直接显示抗体和偶联物的吸光值,并输出为报告。
应用程序3 比值测量
核酸样品的A260/A280、A260/A230比值是大家熟知的,而对于其他样品而言,吸光值比值测量模块可支持自定义的双波长下吸光值比值的计算。如抗体测量A280值,偶联物测量A378,则可得到两个波长的吸光值和比值结果,并输出为报告。
ADC样品测量的良好实践:
1. 可使用N60/NP80的混匀器进行5-10秒的样品充分混匀
2. 基于测量目的,选择对应的应用程序
3. 正确设置背景校正波长,这非常重要
4. 正确的清洁,高浓度或高粘度样品建议进行空白回测
NanoPhotometer®还可配置符合GxP及《药品数据管理规范》要求的合规性软件,具有多层级用户管理、电子记录和电子签名、审计追踪和接入控制等功能,满足客户的合规性流程需要,在包括ADC在内的生物制药工艺开发、中试、生产、质控中具有广泛的使用场景和用户基础。
* 本文转载自「Implen超微量分光光度计」公众号
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